ABSTRACT
During an inspection in plastic houses in Sapopema, Paraná, 90 percent of tomato plants showed leaf abnormalities, probably associated with herbicide toxity. However, virus like symptoms developed in selected hosts after mechanical inoculatation. RT-PCR reactions using primers for an internal region within the movement protein gene of TMV and ToMV resulted in the amplification of a 409 bp cDNA fragment only by TMV primers. Deduced amino acids showed 100 percent identity when compared to TMV movement protein and 94 percent with ToMV. The RT-PCR protocol was efficient for quick and conclusive determination of virus species. The virus was purified and a polyclonal antiserum was raised for future surveys in tomato crops of Paraná. The partial genomic sequence obtained for TMV-Sapopema has been deposited under the accession number DQ173945, which is the first partial genomic sequence of an isolate of TMV from Brazil in the GenBank, and the first tomato virus isolate from Paraná to have some of its biological and molecular properties determined.
Durante uma inspeção em cultivos protegidos de tomate em Sapopema, Paraná, foram observadas anormalidades foliares em 90 por cento das plantas, indicando possivelmente a existência de um problema de fitotoxidade causada por herbicidas. Todavia, os sintomas manifestados nas hospedeiras após os ensaios de inoculação mecânica revelaram que os sintomas estariam relacionados a uma infecção por Tobamovirus. As reações de RT-PCR com oligonucleotídeos específicos para uma região interna da proteína de movimento de dois vírus comuns em tomate, TMV e ToMV, resultaram na amplificação de um fragmento de 409 pares de bases, apenas com os oligonucleotídeos específicos para o TMV. Após o sequenciamento, os aminoácidos deduzidos apresentaram identidade de 100 por cento quando comparados com as seqüências das proteínas de movimento de outros isolados do TMV, e 94 por cento de identidade com seqüências do ToMV. A RT-PCR demonstrou ser um método eficiente para a rápida e conclusiva determinação da espécie viral envolvida na infecção do tomateiro. A seqüência parcial do genoma do isolado de TMV de Sapopema, está depositada no GenBank sob o número de acesso DQ173945, sendo esta a primeira seqüência genômica parcial de um isolado de TMV do Brasil, e conforme o nosso conhecimento, o primeiro isolado de TMV do Paraná a ter algumas de suas propriedades biológicas e moleculares determinadas. Um anti-soro policlonal foi produzido, o que permitirá futuros levantamentos da ocorrência de Tobamovirus nas principais áreas de cultivo de tomate do Paraná.
ABSTRACT
A ferrugem da soja é causada por duas espécies: Phakopsora pachyrhizi e P. meibomiae. No Brasil, a doença tem sido responsável por grandes perdas dessa leguminosa nas últimas safras. Um levantamento na distribuição do patógeno e a identificação correta da espécie prevalecente nas regiões produtoras no Brasil, tornou-se necessário para orientar o planejamento das medidas de controle. A caracterização molecular baseada em PCR tem se mostrado uma ferramenta útil para atender a essa necessidade. Neste estudo, foi realizada a coleta de 86 amostras de folhas infectadas com urediniósporos de Phakopsora, nas principais regiões produtoras de soja do Estado de Minas Gerais (Triângulo, Alto Paranaíba, Noroeste, Sudoeste e Sul), envolvendo 22 municípios. A extração de DNA foi feita pelo método de CTAB. Para a reação da polimerase em cadeia (PCR) foram utilizados conjuntos de "primers" específicos para cada espécie Phakopsora, sendo o par de "primers" Ppm1/Ppa2 específico para P. pachyrhizi e Ppm1/Pme2 para P. meibomiae. Os resultados evidenciam que todas as 86 amostras analisadas pertenciam à espécie P. pachyrhizi, agente etiológico da ferrugem "asiática", ou seja, houve o aparecimento de bandas específicas apenas com o uso do conjunto "primer" Ppm1/Ppa2 com tamanho aproximado de 141 pares de bases. De acordo com esses resultados, pode-se afirmar que a espécie do gênero Phakopsora presente em 100 por cento das áreas analisadas no Estado de Minas Gerais era P. pachyrhizi. Essas informações são importantes para orientar futuros programas de melhoramento, visando resistência ao agente da ferrugem da soja no Estado.
The soybean rust is caused by two species: Phakopsora pachyrhizi e P. meibomiae. In Brazil this diseases has been responsible for great losses in the production of soybean in the last years. The distribution of the disease and identification of the prevalent species in the producing areas in Brazil became necessary to guide the planning control measures. The molecular characterization based on PCR has been showing as useful tool to satisfy that need. In this study 86 samples of leaves infected by Phakopsora from the main areas producing soybean in the State of Minas Gerais (Triângulo, Alto Paranaíba, Noroeste, Sudoeste and Sul) were used. The extraction of DNA was made by the method of CTAB. For the polimerase chain reaction, specific primers were used for each species, been primer Ppm1/Ppa2 specific for P. pachyrhizi and Ppm1/Pme2 specific for P. meibomiae. The results showed that the 86 samples belonged to the species P. pachyrhizi, agent causal of the "Asian" rust. In other words, there was the production of bands specific from the group primer Ppm1/Ppa2 with approximate size of 141 pairs of bases. These results show that the species Phakopsora present in 100 percent of the areas analyzed in the State of Minas Gerais was P. pachyrhizi. This information is important to guide futures breeding programs for resistance to the agent of soybean rust in the State.